?ELISA 試驗(yàn)時(shí),注意事項(xiàng)如下:
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值i大而蛋白量少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
人蘭尼堿受體2英文名稱:Human RYR2 ELISA Kit產(chǎn)品別名:人RYR2 elisa試劑盒用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
產(chǎn)品名稱:人蘭尼堿受體2ELISA試劑盒
英文名稱: Human RYR2 ELISA Kit
規(guī)格 :48T/96T
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。
檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..
標(biāo)本的采集與保存:
1、血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時(shí)或4oC 過(guò)夜,然后1000×g 離心20 分鐘,取上清即
可,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿:用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘,
取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿:
1) 取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2) 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨,該過(guò)程需在冰上進(jìn)行(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過(guò)程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2 次)。
3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測(cè)。
4、其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g 離心20 分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”,每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測(cè)抗原時(shí),可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;
補(bǔ)體的控制方法:
①用EDTA稀釋標(biāo)本;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或凝固不全等;
控制方法:采血時(shí)規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時(shí)采用無(wú)菌試管,經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存;保存時(shí)間不宜過(guò)久,檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本;對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。
公司采用全是進(jìn)口原材料研,發(fā)靈敏性高,高效性,*抗體,吸附均勻、吸附性好,回收利用率高、可靠性強(qiáng),無(wú)效包退包換,公司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全,質(zhì)量可靠。
以下是人蘭尼堿受體2ELISA試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
2’-脫氧cytidine-5,6-d2Anti-E2 tag/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記E2 tag標(biāo)簽抗體IgG
2-基啶Anti-E7 protein/FITC 熒光素標(biāo)記人乳頭瘤病16型E7抗體IgG
替卡格雷Anti-EAAT1/Glast /FITC 熒光素標(biāo)記膠質(zhì)細(xì)胞谷酸運(yùn)載蛋白1 抗體IgG
2-bromo-acetamide-2 ',5-dichlorobenzophenoneAnti-EAAT2/FITC 熒光素標(biāo)記抗膠質(zhì)細(xì)胞谷酸運(yùn)載蛋白2抗體IgG
腺苷5’-硫代酸t(yī)etralithium ] [γ鹽(85%Anti-EAAT3/FITC 熒光素標(biāo)記抗膠質(zhì)細(xì)胞谷酸運(yùn)載蛋白3抗體IgG
*孕烯硫酸鈉Anti-EAG1/FITC 熒光素標(biāo)記鉀離子通道蛋白EAG1抗體IgG
琥珀酰亞胺神經(jīng)酸Anti-EBNA-3/FITC 熒光素標(biāo)記EB病核抗原-3抗體IgG
C3的防火罩Anti-E-cadherin/FITC 熒光素標(biāo)記E-鈣粘附分子抗體IgG
4-deoxy-l-fucoseAnti-ECE1/FITC 熒光素標(biāo)記內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗體IgG
5-hydroxymethyl-2-furancarboxylic酸Anti-ECE2/FITC 熒光素標(biāo)記抗內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶2抗體IgG
人蘭尼堿受體2ELISA試劑盒3β- hydroxyandrosta-5,15-dien-17-onAnti-ECG2/FITC 熒光素標(biāo)記食道癌相關(guān)基因抗體IgG
2-bromo-3,4-dihydro-6-methoxy-1 - [ 4 -(4-苯氧基)苯基]萘Anti-ECM1/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1抗體IgG
RAC順-羥基cotinine-3-carboxylic酸酯Anti-ECP/FITC 熒光素標(biāo)記抗嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白抗體IgG
N-(氧羰基)硫代酰胺Anti-ED-1/FITC 熒光素標(biāo)記外胚層發(fā)育不良抗體IgG
N-叔氧羰- [ n-3-o-isopropylidene ] - d-erythro-sphingosylphosphorylcholineAnti-EDG4/LPA2/FITC 熒光素標(biāo)記溶血脂酸受體蛋白2抗體IgGHuman EGF(Epidermal Growth Factor) ELISA Kit
Human EGF(Epidermal Growth Factor) ELISA Kit化學(xué),合成試, 雙水楊酰胺鈷
Dicumarol進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)66-76-2200mg
CCDC46英文名稱:APOA1BP/AI-BP山羊膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)免疫試盒
化學(xué),固相合成, 2-氧噻
Dicyclohexyl進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)92-51-32ml×2amplues
CCDC63英文名稱:APOBEC1山羊催乳素(PRL)免疫試盒
化學(xué),合成試, 1-BOC-5-氧代氮雜環(huán)庚烷-4-酯
Dicyclomine Hydrochloride進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)67-92-5125mg
CCDC54英文名稱:APOBEC2山羊催產(chǎn)素(OT)免疫試盒
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