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倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用步驟

瀏覽次數(shù):826發(fā)布日期:2021-05-26

倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用步驟:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭,從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭,從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

磷酸化APS抗體
有絲分裂激酶A抗體
干擾素誘導(dǎo)蛋白AIM2抗體
水通道蛋白-2抗體
腫瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶結(jié)合蛋白抗體
ADP核糖基化因子樣11抗體
ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX3抗體
ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX1抗體
ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX2抗體
自噬相關(guān)蛋白10抗體
?;o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體
氨基?;?抗體
脂肪甘油三酯脂酶抗體
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
雙調(diào)蛋白抗體
磷酸化水通道蛋白2抗體
粘附相關(guān)激酶抗體
磷酸化粘附相關(guān)激酶抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化水通道蛋白2抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

 

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